Protocoles

µ-lame I pour culture cellulaire

Plastique traité ("coated")

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La µ-lame I ibidi a été conçue pour la microscopie (en conditions natives), spécialement pour microscopie cellulaire in vitro. Le fond optique clair du canal est équivalent à une lamelle de recouvrement. Elle est conçue pour la microscopie inverse, et permet l’observation par des techniques optiques normales, et en haute résolution comme en contraste de phase, DIC (Differential Interference Contrast), et fluorescence.

Chargement et traitement :

La µ-lame I ibidi est fabriquée en plastique hydrophobe. De ce fait, cela facilite l’adhésion cellulaire, et / ou la physisorption de facteurs d’adhésion (collagène, polylysine, etc.).

Ensemencement des cellules :

Pour la manipulation, la µ-lame I ibidi peut être conservée dans l’emballage ou être stockée dans des racks.

Pour une croissance cellulaire optimale, il est recommandé de remplir le canal avec au moins 2 x104 cellules.

Par conséquent, le canal est rempli avec 2x 104 cellules dans 100 µL. L’addition alternée de 450 µL de milieu dans chaque réservoir donne un volume optimal de 1 mL.

Pour remplacer les fluides, vider d’abord les réservoirs. Ensuite remplir avec le nouveau liquide dans un des réservoirs pour éliminer le reste du liquide du canal. Par cette manipulation, ce liquide peut être retiré à partir du deuxième réservoir.

 Pour extraire directement les fluides du canal, ne pas utiliser de système de pompe à vide, les cellules risqueraient de se détacher à cause de la haute vitesse d’aspiration.

Lorsque l’on remplit la µ-lame I ibidi avec du milieu, faire attention au volume optimal pour la croissance cellulaire de 1 mL. Ne pas fermer fortement le couvercle pour permettre les échanges gazeux.

Lignée cellulaire

Quantité de cellule à charger

température

Concentration en CO2

Confluence en moins de

HeLa

1,5x104/ 100 µL

37°C

5 %

~ 55 h

3T3

1,5x104/ 100 µL

37°C

5 %

~ 53 h

RAT 1

1,5x104/ 100 µL

37°C

5 %

~ 55 h

HBE

1,5x104/ 100 µL

37°C

5 %

~ 75 h

NRK

1,5x104/ 100 µL

37°C

5 %

Jusqu’à 50 h

B 16

1,5x104/ 100 µL

37°C

5 %

~ 50 h

COS 7

1,5x104/ 100 µL

37°C

5 %

~ 65 h

L929

1,5x104/ 100 µL

37°C

5 %

~ 50 h

Sf 9

1,5x104/ 100 µL

27°C

Atmosphère normale

Croissance lente

 Stérilisation :

La µ-lame I est livrée stérile. Veuillez noter que la µ-lame I n’est pas autoclavable, puisque la lame n’est stable que jusqu’à une température de 60 °C. Elle peut être stérilisée à l’alcool (éthanol, 2-propanol).

Matériel :

Plastique avec une haute qualité optique. Le plastique ne présente pas de biréfringence et a une extrême petite autofluorescence. Stable jusqu’à une température de 60°C.

Immersion à l’huile :

Lors de l’utilisation d’objectifs nécessitant l’utilisation d’huile à immersion, utiliser les huiles à immersion spécifiques présentées dans la table suivante. L’utilisation d’autres huiles peut endommager l’objectif.

compagnie

produit

référence

Zeiss

518 F

(Zeiss) 444960

Olympus

50 CC

(Olympus) 35506

Nikon

50 CCM DF

(Nikon) MXA 20351

Leica

518 F

Via Zeiss

                                                             Demande de catalogue Ibidi 2010                

                                                                                   

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