Protocoles

µ-lame I luer pour culture cellulaire

pour utilisation en flux continu

La µ-lame I luer ibidi a été conçue pour la microscopie (en conditions natives), spécialement pour microscopie cellulaire in vitro. Le fond optique clair du canal est équivalent à une lamelle de recouvrement. Elle est conçue pour la microscopie inverse, et permet l’observation par des techniques optiques normales, et en haute résolution comme en contraste de phase, DIC (Differential Interference Contrast), et fluorescence.

Chargement et traitement :

La µ-lame I ibidi est fabriquée en plastique hydrophile. De ce fait, cela facilite l’adhésion cellulaire, et / ou la physisorption de facteurs d’adhésion (collagène, polylysine, etc.).

La plupart des cellules poussent sur les µ-lames traitées. Dans le cas où un traitement spécial comme à la fibronectine est nécessaire, veuillez traiter les µ-lames I comme il est recommandé dans le paragraphe suivant :

·        Dissoudre le biopolymère dans le tampon recommandé (pour la fibronectine : 120 µg/mL dans de l’eau distillée)

·        Traiter le canal de la µ-lame I en le remplissant avec 100 µL de polymère dissout.

Incuber à température ambiante pendant 40 min.

·        Laver la µ-lame I luer ibidi avec 1 mL de PBS.

Pour remplacer les fluides, vider d’abord les réservoirs. Ensuite remplir avec le nouveau liquide dans un des réservoirs pour éliminer le reste du liquide du canal. Par cette manipulation, ce liquide peut être retiré à partir du deuxième réservoir.

Pour extraire directement les fluides du canal, ne pas utiliser de système de pompe à vide, les cellules risqueraient de se détacher à cause de la haute vitesse d’aspiration.

Ensemencement des cellules :

Pour la manipulation, la µ-lame I luer ibidi peut être conservée dans l’emballage ou être stockée dans des racks.

Pour une croissance cellulaire optimale, il est recommandé de remplir le canal avec au moins 2 x10⁴ cellules.

Par conséquent, le canal est rempli avec 2x 10⁴ cellules dans 100 µL. L’addition alternée de 450 µL de milieu dans chaque réservoir donne un volume optimal de 1 mL.

Lorsque l’on remplit la µ-lame I luer ibidi avec du milieu, faire attention au volume optimal pour la croissance cellulaire de 1 mL. Ne pas fermer fortement le couvercle pour permettre les échanges gazeux.

Pour analyser les cellules dans des conditions de flux permanent, remplir complètement les réservoirs. Une fois que les cellules ont adhéré, pousser le couvercle de manière à bien fermer la lame. Les tubes adaptateurs doivent être fixés à l’endroit indiqué sur les couvercles. Le débit du flux doit être entre 300 µL et 3 mL( dépendant de la lignée cellulaire utilisée).

 Stérilisation :

La µ-lame I ibidi est livrée stérile. Veuillez noter que la µ-lame I luer n’est pas autoclavable, puisque la lame n’est stable que jusqu’à une température de 60 °C. Elle peut être stérilisée à l’alcool (éthanol, 2-propanol).

Matériel :

Plastique avec une haute qualité optique. Le plastique ne présente pas de biréfringence et a une extrême petite autofluorescence. Stable jusqu’à une température de 60°C.

 Immersion à l’huile :

Lors de l’utilisation d’objectifs nécessitant l’utilisation d’huile à immersion, utiliser les huiles à immersion spécifiques présentées dans la table suivante. L’utilisation d’autres huiles peut endommager l’objectif.

   Demande de catalogue Ibidi 2010        

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            biovalley@biovalley.fr 

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