Les anticorps primaires anti-cheval conjugués à la PE sont des immunoréactifs fluorescents orange vif optimisés pour la détection à haute sensibilité dans les applications de cytométrie en flux. Produits après immunisation d'hôtes tels que la chèvre, le lapin ou la souris avec des immunoglobulines de cheval purifiées, ces anticorps sont purifiés par affinité puis conjugués de manière covalente à la R-phycoérythrine (R-PE), une phycobiliprotéine de 240 kDa dérivée d'algues rouges (Rhodophyta). La R-PE présente l'un des coefficients d'extinction molaire les plus élevés (≈ 1,96 × 10⁶ M⁻¹cm⁻¹) et des rendements quantiques élevés (≈ 0,84) parmi les fluorophores disponibles, ce qui la rend environ 10 à 20 fois plus brillante que les fluorophores de faible masse moléculaire tels que le FITC et l'Alexa Fluor^® 488. Les maxima d'excitation à 488 nm (principal) et 565 nm (secondaire), associés à une émission à 578 nm, permettent une compatibilité avec les lasers argon-ion standards à 488 nm et les lasers à état solide à 561 nm. Le grand décalage de Stokes réduit les interférences liées à la diffusion de la lumière, tandis que la forte luminosité facilite la détection d'antigènes équins exprimés en très faible nombre de copies à la surface des cellules. Les spécificités disponibles comprennent les anticorps anti-IgG (H+L), reconnaissant les chaînes lourdes et légères ; anti-IgG (Fc), ciblant la région constante ; anti-IgG1 ; anti-IgG2 ; anti-IgA ; ainsi que des réactifs spécifiques des isotypes anti-IgM. Une adsorption croisée étendue contre les immunoglobulines de souris, de rat, de lapin, de bovin, de mouton et d'humain contribue à réduire les liaisons non spécifiques dans les échantillons présentant des réactions croisées.

Applications

Les conjugués à la PE sont largement utilisés en cytométrie en flux et en tri cellulaire activé par fluorescence (FACS) pour l'immunophénotypage des leucocytes équins et la détection de marqueurs de surface, notamment CD4, CD8, CD11a/CD18 (LFA-1), CD14, CD21 et le CMH de classe II (antigène leucocytaire équin). L'exceptionnelle luminosité de la PE permet de détecter des antigènes exprimés en très faible nombre de copies, jusqu'à environ 500 molécules par cellule, ce qui en fait un fluorophore privilégié pour les cibles faiblement abondantes dans les panels multicolores. Dans les essais multiplexés sur billes, les conjugués à la PE servent de fluorophores rapporteurs pour la quantification des cytokines et des biomarqueurs à l'aide de technologies telles que Luminex^® xMAP^®. Ces conjugués peuvent également être utilisés en microscopie d'immunofluorescence, où leur émission orange vif facilite la localisation des antigènes dans les coupes tissulaires et les cellules en culture. Dans les essais de prolifération cellulaire et d'apoptose, les conjugués à la PE permettent la détection de cytokines intracellulaires telles que l'IFN-γ, l'IL-4 et l'IL-10 après stimulation. Ils sont compatibles avec des solutions fixatrices telles que le paraformaldéhyde, mais doivent être protégés de la lumière et ne doivent pas être congelés, car la congélation peut entraîner une agrégation et une perte de fluorescence. Les dilutions de travail typiques sont comprises entre 1:50 et 1:500 pour la cytométrie en flux, entre 1:100 et 1:1 000 pour l'immunofluorescence et entre 1:1 000 et 1:5 000 pour l'ELISA. Ces réactifs sont destinés exclusivement à la recherche et ne sont pas destinés aux procédures diagnostiques.