Les anticorps primaires anti-humains conjugués aux fluorophores DyLight sont des réactifs fluorescents utilisant une famille de fluorophores synthétiques à hautes performances pour la détection d’antigènes humains dans différentes gammes spectrales. Produits par immunisation d’espèces hôtes telles que la chèvre, le lapin ou la souris avec des immunoglobulines humaines purifiées ou des protéines humaines spécifiques, ces anticorps sont purifiés par affinité puis conjugués de manière covalente aux fluorophores DyLight par une chimie à base d’esters NHS ciblant les amines primaires. La série DyLight couvre le spectre du visible au proche infrarouge et comprend notamment DyLight 488 (vert, ex/em 493/518 nm), DyLight 550 (jaune, ex/em 562/576 nm), DyLight 594 (rouge-orangé, ex/em 593/618 nm), DyLight 633 (rouge, ex/em 638/658 nm), DyLight 650 (proche infrarouge, ex/em 652/672 nm) et DyLight 800 (infrarouge, ex/em 777/794 nm).
Ces fluorophores présentent, dans de nombreuses applications, une forte intensité de fluorescence et une bonne photostabilité par rapport à des conjugués utilisant des fluorophores couramment employés tels qu’Alexa Fluor, CyDye et FITC, tout en conservant leur fluorescence sur une large plage de pH comprise entre 4 et 9. Leur grande solubilité dans l’eau permet d’obtenir des rapports fluorophore/protéine élevés tout en limitant les risques de précipitation. Les spécificités disponibles comprennent notamment les anticorps anti-IgG humaine (H+L), anti-IgG humaine (Fc), les réactifs spécifiques d’isotypes ainsi que les anticorps dirigés contre des marqueurs CD humains. Une cross-adsorption étendue contribue à limiter les liaisons non spécifiques.
Applications
Les conjugués DyLight sont utilisés dans diverses plateformes basées sur la fluorescence. En microscopie d’immunofluorescence et en imagerie confocale, leur photostabilité permet des acquisitions prolongées ainsi que des expériences multicolores, tandis que leurs spectres d’émission bien définis peuvent contribuer à limiter le chevauchement spectral entre les différents fluorophores. En cytométrie en flux et en tri cellulaire activé par fluorescence (FACS), leur forte intensité de fluorescence facilite la détection d’antigènes humains faiblement exprimés dans des panels multiparamétriques. Les autres applications comprennent notamment l’immunohistochimie, l’ELISA, le criblage à haut contenu et le Western blot.
Les dilutions de travail sont généralement comprises entre 1:100 et 1:2 000 selon l’application. Conserver à 4 °C, à l’abri de la lumière ; ne pas congeler. Produits destinés exclusivement à la recherche.
