Les anticorps primaires anti-humains conjugués aux Atto sont des immunoréactifs fluorescents utilisant une gamme de colorants synthétiques de haute performance, caractérisés par une luminosité exceptionnelle, des spectres d’émission étroits et une excellente photostabilité. Produits après immunisation d’hôtes tels que la chèvre, le lapin, la souris ou le rat avec des immunoglobulines humaines purifiées ou des protéines humaines spécifiques, ces anticorps sont purifiés par affinité puis liés de manière covalente aux fluorophores Atto par des chimies utilisant des esters de NHS ou des maléimides. La série Atto couvre une large gamme spectrale, de l’ultraviolet au proche infrarouge, avec notamment les variantes Atto 390 (violet), Atto 488 (vert), Atto 565 (orange), Atto 594 (rouge-orange), Atto 633 (rouge), Atto 647N (rouge lointain), Atto 680 (proche infrarouge) et Atto 700 (proche infrarouge).
Les colorants Atto présentent des caractéristiques de performance remarquables : des rendements quantiques élevés (0,5–0,9), une photostabilité exceptionnelle permettant des acquisitions d’images prolongées et des techniques de super-résolution, des spectres d’émission étroits limitant le chevauchement spectral dans les panels multicolores, une excellente solubilité dans l’eau limitant les phénomènes d’agrégation, ainsi qu’une fluorescence stable sur une large plage de pH (2–10). L’Atto 647N, une variante émettant dans le rouge lointain, constitue une alternative robuste au Cy®5 et à l’Alexa Fluor® 647, avec une luminosité accrue et une meilleure résistance au photoblanchiment. Les spécificités disponibles comprennent notamment les anticorps anti-IgG humaine (H+L), anti-IgG humaine (Fc), des réactifs spécifiques des isotypes (IgG1–IgG4, IgA, IgM, IgE, IgD), ainsi que des anticorps dirigés contre les marqueurs CD humains, les cytokines et les protéines de signalisation. Une adsorption croisée approfondie permet de réduire les liaisons non spécifiques.
Applications
Les conjugués Atto sont utilisés dans diverses plateformes avancées basées sur la fluorescence. En microscopie confocale et en microscopie à super-résolution (STED, localisation de molécules uniques), leur excellente photostabilité permet des acquisitions prolongées, la réalisation de séries en profondeur (z-stack) et l’obtention d’une résolution nanométrique (30–50 nm). En cytométrie en flux et en tri cellulaire activé par fluorescence (FACS), leur forte luminosité et leurs spectres d’émission étroits permettent de détecter des antigènes humains faiblement abondants dans des panels multicolores avec une compensation spectrale minimale. En immunohistochimie, ces conjugués facilitent la localisation des antigènes dans les tissus humains tout en réduisant l’autofluorescence de fond. Les autres applications comprennent le criblage à haut contenu, le Western blot fluorescent, les essais multiplex Luminex® et l’imagerie proche infrarouge in vivo.
Les dilutions de travail sont comprises entre 1:100 et 1:2 000 selon la variante du colorant et l’application. Conserver à 4 °C, à l’abri de la lumière ; ne pas congeler. Destinés exclusivement à la recherche.
