Le DAB (3,3'-Diaminobenzidine) est le chromogène le plus utilisé pour une utilisation avec la HRP.  La substrat DAB forme un dépôt coloré marron lorsqu'il réagit avec la péroxidase en présence d'hémoglobine.

L'utilisation du DAB est simple, il suffit d'incuber les lames pendant 5 minutes dans une chambre humide à température ambiante. L'apparition de la coloration peut être suivie par observation au microscope.

Lorsque la coloration est terminée, il est nécessaire de rincer les lames avec de l'eau pendant 1-2 minutes pour retirer l'excés de DAB. Le précipité abtenu à partir du DAB est insoluble dans l'alcool et dans les autres solvants organiques. Les échantillons peuvent être déshydratés et les lames montées de façon permanente (O-Mount).