Les tampons de blocage pour IHC et ICC sont des réactifs essentiels utilisés pour réduire la liaison non spécifique dans les essais d’immunomarquage sur tissus ou sur cellules. Dans ces techniques, les anticorps sont appliqués sur des échantillons biologiques complexes tels que des tissus fixés (IHC) ou des cellules en culture (ICC), où de nombreuses protéines endogènes, surfaces chargées et cellules portant des récepteurs Fc peuvent contribuer à un marquage de fond.

En raison de cette complexité, les tampons de blocage en IHC/ICC remplissent plusieurs fonctions au-delà d’une simple saturation de surface. Ils réduisent l’adsorption non spécifique des anticorps, minimisent la liaison médiée par les récepteurs Fc et suppriment l’activité enzymatique endogène (telle que l’activité peroxydasique dans les systèmes de détection à base de HRP). Sans un blocage efficace, les résultats de marquage peuvent présenter un bruit de fond élevé, un faible contraste et une localisation erronée des antigènes cibles.

Importance des tampons de blocage en IHC/ICC

Le blocage constitue une étape critique en immunohistochimie car il influence directement la spécificité du marquage et la qualité des images. Son importance comprend :

• La réduction de la liaison non spécifique des anticorps aux protéines tissulaires ou cellulaires
• La prévention de la liaison médiée par les récepteurs Fc dans les tissus riches en cellules immunitaires
• La diminution du marquage de fond et des interférences liées à l’autofluorescence
• L’amélioration de la clarté du signal spécifique à l’antigène
• L’amélioration de la précision spatiale de la localisation des protéines
• La réduction des signaux de marquage faux positifs
• La stabilisation des interactions anticorps–antigène lors des étapes d’incubation
• L’amélioration de la reproductibilité entre les coupes tissulaires et les expériences

Dans les systèmes chromogéniques (par exemple, HRP/DAB), un blocage supplémentaire des enzymes endogènes est souvent nécessaire afin d’éviter la génération de signaux non spécifiques indépendants de la liaison des anticorps.

Types de tampons de blocage pour IHC/ICC disponibles

Selon les formulations couramment disponibles, les tampons de blocage pour IHC/ICC peuvent être regroupés en catégories fonctionnelles reflétant leur rôle dans la réduction de types spécifiques d’interférences de fond.

• Tampons de blocage à base de sérum normal : Ils figurent parmi les réactifs de blocage les plus utilisés en IHC et sont dérivés de sérums d’espèces telles que la souris, le lapin, la chèvre ou l’âne.
• Tampons de blocage à base de BSA : Ces tampons utilisent l’albumine sérique bovine comme protéine de blocage principale.
• Tampons de blocage à base de caséine et de protéines générales : Il s’agit de bloqueurs protéiques à large spectre conçus pour une couverture de surface élevée.
• Tampons de blocage prêts à l’emploi versus concentrés : Les tampons de blocage sont disponibles dans différents formats de formulation.
• Tampons de blocage des enzymes endogènes : Ces tampons sont spécifiquement conçus pour bloquer l’activité enzymatique intrinsèque des tissus.
• Tampons de blocage spécifiques d’espèce : Ces réactifs sont optimisés en fonction de l’espèce hôte de l’anticorps.
• Tampons de blocage spécialisés pour ICC/IHC : Ils incluent des formulations propriétaires ou optimisées pour des défis de marquage spécifiques.
• Kits d’échantillons de tampons de blocage : Ces kits fournissent plusieurs formulations de blocage pour des tests comparatifs.