Les anticorps primaires antibactériens conjugués au FITC associent une haute spécificité pour les antigènes bactériens à la fluorescence de l’isothiocyanate de fluorescéine (FITC), permettant la visualisation directe et la quantification des agents pathogènes à l’aide de la microscopie à fluorescence standard, de la cytométrie en flux et des immunodosages fluorescents.
Ces réactifs prêts à l’emploi éliminent le besoin d’anticorps secondaires, réduisant ainsi le bruit de fond et le temps d’analyse, tout en fournissant une fluorescence verte intense (excitation 488 nm, émission 525 nm).
Chimie de conjugaison du FITC
Le FITC se lie de manière covalente aux amines primaires des résidus de lysine et aux extrémités N-terminales via une chimie isothiocyanate, conduisant généralement à l’incorporation de 2 à 4 fluorophores par molécule d’IgG. Cette stratégie de conjugaison préserve plus de 90 % de l’affinité de liaison à l’antigène tout en garantissant un signal fluorescent photostable, compatible avec des applications sur cellules fixées ou vivantes.
Applications majeures
Tests d’immunofluorescence directe (DFA) : Détection rapide des agents pathogènes dans des échantillons cliniques tels que les expectorations, les écouvillons pharyngés et le liquide céphalorachidien (LCR) :
- Legionella pneumophila : Détection à partir d’échantillons d’expectorations
- Mycoplasma pneumoniae : Confirmation des pneumonies atypiques
- Virus de la rage : Marquage des tissus cérébraux (méthode diagnostique de référence)
Détection bactérienne par cytométrie en flux :
- Numération de Staphylococcus aureus dans les hémocultures
- Sérotypage d’Escherichia coli dans l’analyse des aliments et de l’eau
- Évaluation de la sensibilité aux antibiotiques via des tests d’intégrité membranaire
Microscopie à fluorescence :
- Localisation d’Helicobacter pylori dans des biopsies gastriques
- Études d’invasion de Listeria monocytogenes dans des modèles de culture cellulaire
- Visualisation et analyse structurale des biofilms bactériens