Les kits de détection ABC conçus pour la phosphatase alcaline (AP) utilisent la liaison forte et spécifique entre l'avidine et la biotine pour faciliter une immunodétection sensible. Ces kits sont conçus pour détecter les anticorps primaires de plusieurs espèces, généralement la souris et le rat, en un seul test. Un anticorps secondaire biotinylé dirigé contre l'IgG de ces espèces se lie à l'anticorps primaire, et un complexe d'avidine conjugué à la phosphatase alcaline se lie à la biotine, formant un complexe enzymatique hautement actif pour l'amplification du signal.

Amplification et visualisation du signal

L'enzyme phosphatase alcaline catalyse l'hydrolyse de substrats chromogènes tels que le BCIP/NBT ou le Fast Red, entraînant la formation de précipités colorés et insolubles à l'emplacement de l'antigène. Cette réaction enzymatique permet une visualisation précise et sensible au microscope optique, facilitant la localisation des protéines cibles dans les coupes tissulaires, les cultures cellulaires, les tests de transfert et les tests ELISA.

Applications des kits ABC-AP multi-espèces

Ces kits de détection sont largement utilisés en immunohistochimie (IHC), en immunocytochimie (ICC), en Western blot et en ELISA pour l'identification de protéines dans des tissus ou des échantillons provenant de différentes espèces. La possibilité de détecter les anticorps primaires de plusieurs espèces dans un seul test les rend particulièrement utiles dans les études comparatives et les recherches impliquant des modèles animaux. Ils sont compatibles avec une grande variété de préparations tissulaires, telles que les échantillons fixés au formol et inclus dans la paraffine, ainsi que les coupes congelées.

Avantages et bénéfices

• Large compatibilité : conçu pour détecter les anticorps d'espèces couramment utilisées en laboratoire, telles que la souris et le rat, en un seul test, ce qui simplifie et rationalise les flux de travail.

• Haute sensibilité : le complexe avidine-biotine amplifie le signal enzymatique grâce à plusieurs enzymes phosphatases alcalines, améliorant ainsi la détection des antigènes à faible abondance.

• Visualisation flexible : plusieurs substrats chromogènes sont disponibles, offrant différentes couleurs de précipité adaptées au multiplexage ou à des exigences expérimentales spécifiques.

• Réduction du bruit de fond : l'avidine modifiée et les tampons de blocage optimisés minimisent les liaisons non spécifiques et les interférences AP endogènes pour des résultats plus clairs.

• Économique et stable : les kits fournissent des complexes de réactifs stables pour des performances fiables sur de longues périodes et plusieurs tests.

Présentation du protocole

Les protocoles impliquent généralement le blocage de l'activité de la phosphatase alcaline endogène, l'incubation des échantillons avec des anticorps primaires provenant de souris et/ou de rats, l'application d'anticorps secondaires biotinylés ciblant ces espèces, l'incubation avec un complexe avidine-phosphatase alcaline et le développement d'un substrat chromogène. Les temps de réaction et le choix du substrat peuvent être ajustés afin d'optimiser la qualité du signal.

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