La détection en immunohistochimie est une étape cruciale qui permet de visualiser des protéines spécifiques dans des échantillons de tissus. En traduisant la liaison des anticorps à leurs antigènes cibles en un signal visible, les systèmes de détection révèlent la présence, la localisation et la distribution des protéines, ce qui est fondamental pour comprendre les processus biologiques et diagnostiquer les maladies.
Détection chromogénique vs détection fluorescente
Il existe deux grandes catégories de méthodes de détection : chromogéniques et fluorescentes. La détection chromogénique repose sur des anticorps conjugués à des enzymes qui réagissent avec des substrats pour produire des précipités colorés, visibles au microscope à champ clair. Cette méthode est largement utilisée en raison de sa stabilité et de sa facilité d'interprétation. La détection fluorescente utilise des anticorps marqués par des fluorophores excités par des longueurs d'onde spécifiques, ce qui permet le multiplexage et une grande sensibilité, mais nécessite un équipement de microscopie spécialisé.
Méthodes de détection courantes
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Détection directe : implique des anticorps primaires directement marqués avec des enzymes ou des fluorophores, ce qui permet une procédure simple en une seule étape, mais avec une sensibilité limitée.
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Détection indirecte : utilise des anticorps primaires non marqués, suivis d'anticorps secondaires marqués avec des enzymes ou des fluorophores, ce qui permet une amplification du signal et une plus grande flexibilité.
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Méthode ABC (complexe avidine-biotine) : amplifie les signaux en utilisant la forte affinité entre l'avidine et la biotine ; largement utilisée, mais parfois affectée par la biotine endogène.
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Kits de détection à base de polymères : utilisent des polymères marqués par des enzymes fixés à des anticorps secondaires, ce qui réduit le bruit de fond et simplifie les flux de travail. Il s'agit notamment de kits spécialisés tels que les kits de coloration Mouse on Mouse ou Human on Human.
Techniques avancées et variantes
Des techniques telles que l'amplification du signal tyramide (TSA) offrent une sensibilité élevée en déposant de manière covalente des tyramides marqués sur les sites antigéniques. La détection fluorescente multiplexe permet la visualisation simultanée de plusieurs protéines. D'autres méthodes spécialisées comprennent les points quantiques et le marquage métallique pour des applications spécifiques.
Sélection du système de détection approprié
Le choix d'un système de détection dépend de plusieurs facteurs, notamment le type d'échantillon, la protéine cible, la sensibilité souhaitée et l'équipement disponible. Une sélection et une optimisation appropriées sont essentielles pour obtenir des résultats d'immunomarquage fiables et de haute qualité
