La technique FISH (Hybridation In Situ en Fluorescence) est une méthode clé en cytogénétique moléculaire permettant de détecter et de localiser des séquences d'ADN spécifiques sur les chromosomes, facilitant une analyse génétique précise dans les contextes de recherche et de diagnostic clinique.
Principes de la FISH
La technique FISH repose sur l'utilisation de sondes d'ADN ou d'ARN marquées par fluorescence et complémentaires aux séquences cibles. Ces sondes sont dénaturées, puis hybridées à l'ADN chromosomique ou aux noyaux fixés sur des lames. Après l'hybridation, les lames sont lavées pour éliminer l'excès de sonde, et les sites hybrides sont visualisés au microscope à fluorescence. Les signaux lumineux correspondent aux localisations précises des séquences d'ADN ciblées.
Applications en cytogénétique
La FISH a révolutionné l'analyse cytogénétique en offrant des avantages uniques par rapport aux techniques classiques de bandes :
- Détection des anomalies numériques et structurelles : Permet d'identifier des délétions, duplications, inversions, translocations et aneuploïdies, aussi bien en métaphase qu'en interphase.
- Diagnostic en oncologie : Utilisée pour détecter et caractériser les altérations chromosomiques associées aux cancers hématologiques et aux tumeurs solides, même sur des échantillons inadaptés au caryotype conventionnel (ex. tissus fixés au formol et inclus en paraffine).
- Diagnostic prénatal et postnatal : Permet une évaluation rapide des anomalies chromosomiques sur des cellules fœtales issues d'amniocentèse ou de biopsie de villosités choriales.
- Cartographie génétique et organisation du génome : Facilite l'attribution de gènes à des localisations chromosomiques précises.
- Détection de microdélétions et réarrangements cryptiques : Révèle des anomalies submicroscopiques invisibles au caryotype standard.
Avantages clés
Peut être réalisée sur des cellules non divisantes (interphase), permettant l'analyse d'échantillons inaccessibles à la cytogénétique conventionnelle.
Permet l'utilisation simultanée de plusieurs sondes fluorescentes, offrant une imagerie multicolore détaillée de plusieurs cibles dans une même cellule.
Très grande sensibilité et spécificité pour les séquences ciblées.
La technique FISH demeure une méthode de référence pour l'analyse cytogénétique ciblée, offrant une résolution fine, une grande souplesse et une valeur diagnostique qui ne cessent d'étendre les frontières de la recherche génomique et de la médecine personnalisée.
