Les systèmes de marquage en immunohistochimie (IHC) permettent la localisation visuelle de protéines spécifiques au sein de coupes tissulaires. Ils constituent des outils fondamentaux en diagnostic anatomopathologique et en recherche biomédicale, permettant d’identifier, de cartographier la distribution et d’évaluer l’abondance relative des antigènes cibles in situ.

Concept de base

L’immunohistochimie combine les principes de l’immunologie et de l’histologie. Des anticorps spécifiques se lient aux antigènes cibles dans des tissus fixés, suivis d’une détection à l’aide d’anticorps secondaires couplés à une enzyme générant un précipité coloré au site de liaison. Les chromogènes couramment utilisés incluent le DAB, produisant un signal brun, et l’AEC, générant un signal rouge, généralement contrastés par une contre-coloration nucléaire à l’hématoxyline (bleue).

Procédure standard

• Fixation des échantillons tissulaires (généralement au formol)
• Inclusion en paraffine et microtomie (épaisseur d’environ 4 µm)
• Déparaffinage et réhydratation
• Récupération antigénique (méthodes thermiques ou enzymatiques)
• Blocage des sites de liaison non spécifiques
• Incubation avec l’anticorps primaire (généralement toute une nuit)
• Application d’un anticorps secondaire conjugué à une enzyme
• Développement du chromogène
• Contre-coloration et montage