Le kit PicoGreen dsDNA est un test fluorimétrique hautement sensible et spécifique, conçu pour la quantification de l’ADN double brin (dsDNA). Il est largement utilisé en biologie moléculaire pour mesurer avec précision la concentration en dsDNA dans divers échantillons biologiques, même en présence d’ADN simple brin (ssDNA), d’ARN ou de nucléotides libres.
Principe
Ce test repose sur le réactif PicoGreen, un colorant fluorescent pour les acides nucléiques qui se lie sélectivement à l’ADN double brin. Lors de cette liaison, le PicoGreen présente une forte augmentation de son intensité de fluorescence, avec des maxima d’excitation et d’émission situés respectivement à environ 502 nm et 523 nm. Cette amplification du signal fluorescent permet la détection de très faibles concentrations d’ADN double brin, jusqu’à quelques picogrammes par millilitre.
Protocole expérimental
Le test PicoGreen est simple et rapide à mettre en œuvre. La solution de travail du colorant est préparée en diluant le réactif PicoGreen concentré. Cette solution est ensuite ajoutée directement à l’échantillon contenant l’ADN double brin. Après une incubation d’environ 5 minutes à température ambiante, à l’abri de la lumière, l’intensité de fluorescence est mesurée à l’aide d’un lecteur de microplaques ou d’un fluoromètre. La fluorescence obtenue est comparée à une courbe étalon d’ADN pour déterminer avec précision la concentration en dsDNA sur une large gamme dynamique couvrant trois ordres de grandeur.
Performances et spécificité
Le PicoGreen détecte spécifiquement l’ADN double brin et présente une interférence minimale avec l’ADN simple brin, l’ARN, les protéines ou les nucléotides libres présents dans les échantillons. Sa sensibilité est nettement supérieure à celle des méthodes de quantification basées sur l’absorbance UV, permettant d’économiser les échantillons grâce à de faibles volumes requis. De plus, le test est compatible avec les formats de microplaques 96 et 384 puits, facilitant les applications à haut débit.
Le kit PicoGreen dsDNA offre une méthode rapide, sensible et spécifique pour la quantification de l’ADN double brin. Sa détection par fluorescence assure une précision supérieure aux méthodes d’absorbance, avec une excellente tolérance aux contaminants courants. Sa simplicité d’utilisation et sa compatibilité avec les formats de microplaques en font un outil idéal pour les laboratoires de recherche et cliniques nécessitant une mesure fiable du dsDNA.
