La gélose au citrate de Simmons peut être utilisé pour distinguer E. coli et Enterobacter aerogenes et pour aider à différencier les membres du groupe des salmonelles. Ce milieu est basé sur l’utilisation du citrate comme source de carbone. Les organismes capables d'utiliser le citrate se développent bien à la surface du milieu. L'alcalinisation du milieu le fait passer du vert au bleu. Si l'organisme ne peut pas utiliser le citrate, la croissance est faible ou nulle et le milieu reste inchangé. Le dihydrogène-phosphate d'ammonium est la seule source d'azote. Le phosphate dipotassique agit comme un tampon. Le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique du milieu. Le citrate de sodium est la seule source de carbone dans ce milieu. Le sulfate de magnésium est un cofacteur pour diverses réactions métaboliques. L'agar bactériologique est l'agent solidifiant. Les organismes capables d'utiliser le dihydrogénophosphate et le citrate d'ammonium se développent sans restriction sur ce milieu. Si le citrate peut être utilisé, le microbe accumulera des sous-produits alcalins ou basiques.