Les consommables pour Western Blot regroupent l'ensemble des produits nécessaires au transfert de protéines depuis un gel d'électrophorèse vers un support solide, puis à leur détection immunologique. Le Western Blot repose sur ce transfert vers une membrane support suivi d'une immunodétection, ce qui en fait une technique largement utilisée pour la visualisation et l'identification de protéines. Cette catégorie couvre principalement les membranes de transfert, le papier filtre, les tampons de transfert et de lavage, ainsi que les réactifs de blocage et de détection.
Composants principaux
Le support de transfert est généralement de deux types : la nitrocellulose ou le fluorure de polyvinylidène (PVDF), tous deux capables de lier les protéines avec une forte affinité. Les membranes en PVDF doivent être humidifiées au méthanol à 100 % avant utilisation, bien qu'elles puissent ensuite être utilisées avec un tampon de transfert sans méthanol. Le papier filtre pour transfert, composé à 100 % de fibres de coton, assure un flux uniforme du tampon à travers le gel et ne contient aucun additif susceptible d'interférer avec le processus de transfert ; il est disponible en épaisseur standard et en épaisseur extra-forte, cette dernière étant recommandée pour les transferts semi-secs en raison de sa capacité de rétention de fluide plus élevée. Le tampon de transfert utilisé en électrotransfert contient généralement du Tris base, de la glycine et du méthanol (la concentration variant selon le protocole), tandis que le tampon de lavage TBST (tampon Tris salin additionné de 0,05 % de Tween-20) et un tampon de blocage (par exemple, 5 % d'albumine sérique bovine) sont utilisés lors des étapes suivantes. Les réactifs de blocage doivent saturer l'ensemble des sites non occupés de la membrane sans déplacer la protéine cible ni interférer avec les anticorps ou les réactifs de détection.
Formats et applications
Aujourd'hui, des membranes et papiers filtres prédécoupés, voire des sandwichs de transfert préassemblés, sont disponibles pour s'adapter directement aux dimensions des gels, ce qui simplifie et accélère la procédure. Certains systèmes intègrent une membrane de transfert pré-activée directement dans une pile consommable, permettant un transfert à sec en quelques minutes. Selon la méthode de détection retenue (colorimétrique, chimiluminescente ou fluorescente), le choix de la membrane peut influencer le signal et le bruit de fond ; par exemple, des membranes PVDF à faible autofluorescence ont été développées spécifiquement pour réduire le bruit de fond lors d'une détection par fluorescence. Le transfert électrophorétique peut être réalisé en conditions humides ou semi-sèches, le transfert humide étant généralement considéré comme plus fiable, notamment pour les protéines de grande taille, car il limite le risque de dessèchement du gel.
