Webinaire : Workflows enzymatiques pour la caractérisation des protéines

Ce webinaire présente un protocole enzymatique intégré permettant la caractérisation structurale complète des protéines thérapeutiques, incluant les anticorps monoclonaux, les biosimilaires et les protéines recombinantes. La présentation illustre comment la PNGase F, la trypsine de qualité spectrométrie de masse et la carboxypeptidase B agissent de manière synergique pour permettre une analyse exhaustive comprenant le profilage des N-glycanes, la cartographie peptidique avec identification des modifications post-traductionnelles (PTM) et la caractérisation de l’extrémité C-terminale.

Dans le cadre du développement et du contrôle qualité des biothérapies, la caractérisation détaillée des attributs de qualité critiques (Critical Quality Attributes – CQAs) constitue une exigence essentielle pour garantir la sécurité, l’efficacité et la cohérence inter-lots. La N-glycosylation exerce une influence majeure sur la pharmacocinétique, les fonctions effectrices et le potentiel d’immunogénicité, rendant indispensable un profilage précis de l’hétérogénéité des glycanes par libération enzymatique au moyen de la PNGase F suivie d’une analyse appropriée. La cartographie peptidique, réalisée grâce à une digestion par trypsine de haute qualité, demeure une technique de référence pour confirmer l’intégrité de la séquence primaire en acides aminés, détecter les PTM spécifiques de site (notamment oxydation, désamidation et glycosylation), et identifier les variants de séquence ou les formes tronquées — exigences clés dans les dossiers réglementaires pour les nouvelles entités thérapeutiques et les biosimilaires. Complémentairement, le traitement par carboxypeptidase B permet une évaluation précise de l’hétérogénéité C-terminale, incluant le clivage de la lysine, qui influence les profils de charge et les impuretés liées au produit, souvent surveillées par chromatographie échangeuse d’ions ou spectrométrie de masse.

Cette approche multi-enzymatique surmonte les limites des analyses mono-méthodiques en fournissant des données orthogonales et synergiques qui soutiennent des exercices robustes de comparabilité, l’optimisation des procédés et la conformité aux exigences réglementaires strictes (notamment les lignes directrices ICH Q6B et les évaluations de similarité pour les biosimilaires). Les participants acquerront une compréhension approfondie du rationnel scientifique sous-tendant ce protocole, sauront interpréter les résultats analytiques issus de chaque étape enzymatique et appréhenderont son application pratique dans la résolution des CQAs déterminants pour le succès des dépôts réglementaires et le développement biopharmaceutique.

Intervenant

Dr. Pavan Kumar Avula, PhD
Senior Manager – Techno Commercial, Provis Biolabs

Le Dr Avula est titulaire d’un doctorat en neurosciences de l’Université de Melbourne et d’une maîtrise en biotechnologie de l’Université La Trobe. En tant que Senior Manager chez Provis Biolabs, il se spécialise dans l’accompagnement des protocoles analytiques dédiés à la caractérisation des protéines thérapeutiques, en collaboration étroite avec les chercheurs biopharmaceutiques et les laboratoires de contrôle qualité. Ses fonctions conjuguent une solide expertise scientifique et une maîtrise de la mise en œuvre pratique.