ABC detection kits for mouse alkaline phosphatase rely on the high-affinity interaction between avidin and biotin to amplify immunodetection signals. The system typically involves a primary antibody raised in mouse that binds to the target antigen. A biotinylated secondary antibody specific to mouse IgG then binds the primary antibody. This is followed by Les kits de détection ABC pour la phosphatase alcaline murine reposent sur l'interaction à haute affinité entre l'avidine et la biotine pour amplifier les signaux d'immunodétection. Le système implique généralement un anticorps primaire produit chez la souris qui se lie à l'antigène cible. Un anticorps secondaire biotinylé spécifique à l'IgG de souris se lie ensuite à l'anticorps primaire. Vient ensuite l'ajout d'une molécule d'avidine conjuguée à la phosphatase alcaline, formant un complexe avidine-biotine-enzyme qui amplifie considérablement le signal de détection.
Amplification du signal et réaction du substrat
La phosphatase alcaline catalyse l'hydrolyse de substrats chromogènes tels que le BCIP/NBT ou le Fast Red en un précipité coloré insoluble qui se localise précisément là où l'antigène est présent. Cela permet une visualisation claire des protéines ou molécules cibles dans les coupes tissulaires, les cellules, les transferts ou les plaques ELISA.
Applications des kits ABC-AP pour souris
Ces kits sont largement utilisés en immunohistochimie (IHC) et en immunocytochimie (ICC) pour la localisation d'antigènes murins dans des échantillons de tissus inclus dans la paraffine ou congelés. Ils sont également couramment utilisés dans les tests de western blot, ELISA et d'hybridation in situ. Grâce à l'amplification enzymatique, ils permettent une détection sensible de cibles à faible abondance.
Avantages de la détection ABC-AP par souris
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Haute sensibilité : le système avidine-biotine permet à plusieurs molécules de phosphatase alcaline de se lier à chaque site cible, ce qui améliore la puissance du signal.
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Polyvalence : compatible avec une large gamme d'anticorps primaires ou secondaires biotinylés.
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Visualisation flexible : plusieurs options de substrats permettent de choisir en fonction des besoins expérimentaux en matière de couleur et de contraste.
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Meilleur rapport signal/bruit : une faible coloration de fond est souvent obtenue en modifiant l'avidine afin de réduire les liaisons non spécifiques et en bloquant l'activité de la phosphatase alcaline endogène dans les échantillons.
Aperçu général du protocole
Le protocole type comprend le blocage de la phosphatase alcaline endogène, l'incubation avec un anticorps primaire de souris, l'application d'un anticorps secondaire anti-souris biotinylé, puis l'incubation avec un complexe avidine-phosphatase alcaline. La dernière étape consiste en le développement du substrat, généralement dans un délai de 5 à 30 minutes, suivi d'une visualisation au microscope.
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