Mix PCR pour longs fragments
La PCR pour longs fragments (Long range PCR) permet l'amplification de produits PCR plus longs que ceux amplifiés par les Taq polymérases conventionnelles. Il est possible d'amplifier des fragments de plus de 20 kb avec un ADN génomique de bonne qualité. L'amplification de longs fragments d'ADN est nécessaire pour un certains nombres d'applications comme le séquençage et le clonage.
Un Master Mix PCR est une solution prête à l'emploi contenant la Pfu polymérase, les dNTPs, le MgCl2 et le tampon de réaction à des concentrations optimales pour la PCR.
Le Master Mix contient tous les composants nécessaires pour la PCR, à l'exception de l'échantillon d'ADN à amplifier et les amorces spécifiques de la séquence à amplifier.
ADN polymérase
L'ADN polymérase est résistante à la chaleur et reste intacte pendant la dénaturation de l'ADN. Elle permet l'amplification de la séquence ADN cible. On distingue différents types d'ADN polymérases haute-fidélité dont la Pfu polymérase, une ADN polymérase naturellement fidèle grâce à son activité exonucléase 3'-5' ainsi que des ADN polymérases modifiées pour obtenir des capacités de fidélité supérieures.
Les modifications apportés aux ADN polymérases pour leur apporter une fidélité supérieure sont de différentes natures : modification génétique, modification chimique, mélange de plusieurs enzymes ...
Désoxynucleotides triphosphates (dNTPs)
Les dNTPs sont les 4 nucléotides de base : dATP, dCTP, dGTP, et dTTP. Les dNTPs sont les briques nécessaires à la construction de nouveaux brins d'ADN. Ces 4 nucloétides sont typiquement ajoutés à la réaction de PCR à des noveaux équimolaires pour une incorporation optimale. Dans les applications de PCR classiques, la concentration finale recommandée pour chaque dNTP est généralement de 0.2 mM.
Ions magnesium (Mg2+)
Les ions magnésium (Mg2+) fonctionnent comme un co-facteur pour l'activité de l'ADN polymérase en aidant à l'incorporation des dNTPs pendant la polymérisation. Les ions magnésium catalysent la formation de pont phosphodiester au niveau du site actif de l'enzyme entre l'extrémité 3' OH de l'amorce et le groupement phosphate du dNTP. De plus les ions Mg2+ facilitent la formation de complexes entre les amorces et l'ADN en stabilisant les charges négatives. Les ions Mg2+ sont présents dans le Master Mix sous forme d'une solution MgCl2.
Tampon
La PCR d'effectue dans un tampon qui apporte un environnement chimique nécessaire à l'activité de l'ADN polymérase. Ce tampon est généralement un tampon Tris/HCl avec un pH d'environ (typiquement 8.3-8.8). Une solution de KCl peur être ajoutée pour faciliter l'hybridation des primers mais la concentration ne doit pas excéder 50 mM pour ne pas inhiber l'enzyme.
Foire aux questions (FAQ)
Comment trouver rapidement un produit mix pcr ?
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Biovalley distribue-t-il plusieurs références dans la catégorie mix pcr ?
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Peut-on demander un devis pour les produits mix pcr ?
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Comment savoir si un produit mix pcr est disponible à la commande ?
La disponibilité d'un produit mix pcr dépend de la référence, du fournisseur, du conditionnement et du pays de livraison. Pour obtenir une information actualisée, consultez la fiche produit ou contactez Biovalley avec la référence ou le nom du produit recherché.
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Les produits mix pcr sont-ils tous disponibles dans les mêmes conditions ?
Non. Les conditions de commande, de livraison, de stockage ou de documentation peuvent varier selon le type de produit, le fournisseur et la réglementation applicable. Certaines références peuvent nécessiter une validation spécifique, un transport adapté, une fiche de sécurité ou des informations complémentaires avant commande.
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