La contamination par les mycoplasmes demeure un problème majeur dans les systèmes de culture cellulaire, affectant la physiologie cellulaire, l’expression génique et la reproductibilité des expériences. La coloration fluorescente au Hoechst 33258 est une méthode rapide, basée sur la microscopie, utilisée pour le dépistage de routine des contaminations par les mycoplasmes in vitro.
Le Hoechst 33258 est un colorant bisbenzimidazole perméant aux cellules qui se lie sélectivement aux régions riches en A–T de l’ADN double brin. Après fixation et coloration, la contamination par les mycoplasmes apparaît sous forme de signaux fluorescents extranucléaires caractéristiques, ponctiformes ou filamenteux, autour des noyaux des cellules hôtes sous illumination UV.
Caractéristiques principales et avantages
- Test de dépistage rapide : permet une détection en quelques heures sans nécessiter d’amplification par culture.
- Visualisation directe : autorise une évaluation in situ de la contamination dans les monocouches cellulaires adhérentes.
- Procédure simple : compatible avec la microscopie à fluorescence standard et les protocoles de laboratoire courants.
Applications en recherche et en bioproduction
- Contrôle qualité de routine des cultures cellulaires et surveillance des contaminations.
- Dépistage préalable aux expériences (transfection, analyses omiques, essais cellulaires).
- Suivi des systèmes de production biopharmaceutique afin de garantir l’intégrité des cultures.
Limites
- Sensibilité modérée : moins sensible que les méthodes basées sur la PCR et peut ne pas détecter les contaminations de faible niveau.
- Signaux non spécifiques : des débris cellulaires ou des corps apoptotiques peuvent générer des faux positifs.
- Absence d’identification des espèces et d’évaluation de la viabilité : nécessite des tests de confirmation (par exemple PCR ou culture).
