Les tampons et réactifs de blocage sont essentiels dans les protocoles d’immunohistochimie (IHC) pour minimiser la liaison non spécifique des anticorps et réduire le marquage de fond. Ces étapes sont cruciales pour garantir un marquage spécifique et à fort contraste des antigènes cibles.
Objectif du blocage
- Réduire la liaison non spécifique : Les anticorps peuvent se lier à des protéines non cibles ou à des sites chargés/hydrophobes dans le tissu, provoquant un marquage de fond.
- Améliorer le rapport signal/bruit : Le blocage sature ces sites non spécifiques, garantissant que la liaison des anticorps est principalement dirigée vers l’antigène d’intérêt.
- Prévenir la réactivité croisée : Particulièrement important dans les tissus riches en récepteurs Fc ou en biotine endogène.
Types de tampons et réactifs de blocage
| Réactif de blocage | Composants principaux | Quand utiliser | Principaux avantages |
|---|---|---|---|
| Sérums normaux | Chèvre, âne, souris, etc. | Avant l’anticorps primaire ; assortir à l’hôte secondaire | Bloque les récepteurs Fc, réduit la réactivité croisée |
| Solutions de blocage protéique | BSA, caséine, gélatine | Protocoles standards, applications sans animaux | Recouvre les sites non spécifiques, options sans animaux |
| Solutions de blocage sans animaux | Protéines synthétiques ou végétales | Échantillons sensibles/réactifs croisés | Sans protéines animales, réduit la réactivité croisée |
| Kits de blocage avidine/biotine | Avidine, biotine | Avec systèmes de détection avidine-biotine | Bloque la biotine endogène, prévient le bruit de fond |
La sélection et l’application appropriées des tampons et réactifs de blocage sont fondamentales pour obtenir des résultats IHC spécifiques et de haute qualité avec un minimum de marquage de fond.
Considérations pratiques
- Ordre d’application : Le blocage est effectué après l’inactivation des enzymes endogènes mais avant l’incubation de l’anticorps primaire.
- Optimisation : Le choix et la concentration du réactif de blocage doivent être optimisés pour chaque tissu et anticorps afin d’éviter de masquer les épitopes ou un blocage insuffisant.
- Lavage : Toujours bien laver après le blocage pour éliminer l’excès de protéines ou de réactifs qui pourraient interférer avec la liaison des anticorps.
