L’immunohistochimie (IHC) repose sur une gamme de tampons et de réactifs pour garantir un marquage clair, spécifique et reproductible des coupes de tissu. Ces composants sont essentiels à chaque étape du flux de travail IHC, de la préparation du tissu à la visualisation.
Principaux tampons et solutions en IHC
- Tampons de fixation
- Formol tamponné neutre à 10 % : Le fixateur le plus courant pour préserver la morphologie et l’antigénicité des tissus.
- Fixateurs alternatifs : Méthanol, éthanol, acétone, solution de Bouin et formol-zinc, selon le type de tissu et la sensibilité de l’antigène.
- Tampons de récupération d’antigène
Objectif : Démasquer les épitopes masqués par la fixation, facilitant l’accès des anticorps
- Tampons de lavage
- Solution saline tamponnée au phosphate (PBS) : Largement utilisée pour les lavages entre les étapes ; maintient des conditions isotoniques.
- Solution saline tamponnée au Tris (TBS) : Préférée dans certains protocoles, notamment avec la détection par phosphatase alcaline, car le phosphate peut inhiber l’activité de l’AP.
- Réactifs de quenching
- Peroxyde d’hydrogène (H₂O₂) : Utilisé (généralement à 3 %) pour inactiver l’activité peroxydase endogène, évitant les faux positifs dans la détection basée sur le HRP.
- Lévamisole : Inhibe l’activité de la phosphatase alcaline endogène, utilisé dans les systèmes de détection basés sur l’AP.
- Tampons et réactifs de blocage
Objectif : Réduire la liaison non spécifique des anticorps et le marquage de fond
- Diluants pour anticorps
Objectif : Diluer les anticorps primaires et secondaires à des concentrations optimales tout en maintenant la stabilité et en minimisant la liaison non spécifique
- Réactifs de détection
- Chromogènes : DAB (3,3'-diaminobenzidine), AEC, BCIP/NBT pour la visualisation de l’activité HRP ou AP.
- Tampons de substrat : Fournis avec les kits de chromogènes pour optimiser les conditions de réaction enzymatique.
- Médias de montage
- Médias aqueux ou à base de résine : Utilisés pour préserver les lames colorées pour l’imagerie et le stockage.
