La récupération d’antigène en immunohistochimie (IHC) est une étape cruciale utilisée pour démasquer les sites antigéniques dans les échantillons de tissus fixés au formol et inclus en paraffine. Lors de la fixation, le formaldéhyde crée des ponts de méthylène entre les protéines, masquant les épitopes et empêchant une liaison efficace des anticorps. La récupération d’antigène brise ces ponts pour exposer les sites antigéniques, améliorant la liaison des anticorps et la qualité du marquage.

Principales méthodes de récupération d’antigène

Il existe deux principales méthodes de récupération d’antigène :

• Récupération d’épitope par chaleur (HIER) : Cela implique le chauffage des coupes de tissu dans des solutions tampons spécifiques à haute température et pression (par exemple, à l’aide d’un autocuiseur ou d’un micro-ondes scientifique). Les tampons couramment utilisés incluent :
  • Tampon citrate de sodium (pH 6.0)
  • Tampon Tris-EDTA (pH 9.0)
  • Tampon EDTA (pH 8.0)

Ces tampons aident à briser les ponts de méthylène et à restaurer l’antigénicité. Le choix du tampon et du pH dépend de l’antigène cible et de l’anticorps utilisé.

• Récupération enzymatique : Utilise des enzymes protéolytiques telles que la trypsine, la pepsine ou la protéinase K pour digérer les protéines masquant les épitopes. Cette méthode est moins couramment utilisée aujourd’hui mais reste importante pour certains antigènes comme les immunoglobulines ou les protéines du complément.

Choix du tampon et pH

• Les tampons à faible pH (~3-5, par exemple, glycine-HCl) ou légèrement acides à neutres (~6, par exemple, tampon citrate) sont souvent utilisés pour certains antigènes.
• Les tampons à pH élevé (~8-10, par exemple, EDTA ou Tris-EDTA) sont préférés pour d’autres, notamment les anticorps spécifiques à la phosphotyrosine.
• Le tampon et le pH optimaux doivent être déterminés expérimentalement pour chaque paire anticorps-antigène.

Considérations pratiques

• La récupération par chaleur est généralement préférée aux méthodes enzymatiques en raison d’une meilleure reproductibilité et d’une meilleure préservation de la morphologie des tissus.
• Les micro-ondes de qualité scientifique ou les autocuiseurs sont recommandés pour la HIER plutôt que les micro-ondes domestiques.
• Il est conseillé de tester différents tampons et méthodes de récupération pour optimiser le marquage pour chaque anticorps.