En immunohistochimie (IHC), le quenching cible principalement les enzymes et molécules endogènes dans les tissus qui peuvent interférer avec les réactifs de détection. Par exemple, de nombreux tissus contiennent de la peroxydase endogène, qui peut réagir avec les systèmes de détection basés sur la peroxydase de raifort (HRP), provoquant un marquage faussement positif. Pour éviter cela, un blocage de peroxydase utilisant du peroxyde d’hydrogène (généralement à 3 %) est appliqué après la récupération d’antigène. Cette étape inactive l’enzyme peroxydase endogène, garantissant que seul le HRP lié à l’anticorps produit un signal.
De même, l’activité de la phosphatase alcaline (PA) peut être inhibée à l’aide de réactifs comme le lévamisole. De plus, les tissus peuvent contenir de la biotine endogène, qui peut se lier à l’avidine ou à la streptavidine utilisées dans certains systèmes de détection, causant un marquage de fond. Pour y remédier, un kit de blocage avidine/biotine est utilisé pour saturer les sites de liaison de la biotine et de l’avidine endogènes avant l’incubation des anticorps.
Blocage pour prévenir la liaison non spécifique
Après le quenching, des étapes de blocage sont effectuées pour empêcher la liaison non spécifique des anticorps aux protéines tissulaires ou aux récepteurs Fc, ce qui peut provoquer un marquage de fond diffus. Les solutions de blocage protéique contenant de l’albumine de sérum bovin (BSA), de la caséine ou des tampons propriétaires commerciaux saturent les sites de liaison hydrophobes et ioniques sur les protéines tissulaires. Les sérums de blocage, généralement du sérum normal de l’espèce dans laquelle l’anticorps secondaire est produit (par exemple, sérum de chèvre pour les anticorps secondaires de chèvre), bloquent les récepteurs Fc et autres sites non spécifiques. Cette étape est cruciale pour réduire le bruit de fond et améliorer le rapport signal/bruit.
La liaison entre le quenching et le blocage
Ensemble, ces étapes forment une stratégie coordonnée : le quenching neutralise les activités enzymatiques endogènes et la biotine, tandis que le blocage empêche les interactions non spécifiques des anticorps. Typiquement, le quenching est effectué immédiatement après la récupération d’antigène, suivi du blocage avant l’application de l’anticorps primaire. Cette liaison garantit que le marquage IHC est spécifique, clair et reproductible, minimisant les faux positifs et le bruit de fond qui pourraient obscurcir la détection réelle de l’antigène.
